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兩種不同的總蛋白提取方法總結(jié)
蛋白質(zhì)提取與制備蛋白質(zhì)種類很多，性質(zhì)上的差異很大，既或是同類蛋白質(zhì)，因選用材料不同，使用方法差別也很大，且又處于不同的體系中，因此不可能有一個(gè)固定的程序適用各類蛋白質(zhì)的分離。本文分別介紹了從新鮮樣品中提取總蛋白和從Trizol裂解液中分離總蛋白的方法和步驟。
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考馬斯亮藍(lán)染色原理
考馬斯亮藍(lán)染色法也稱考馬斯藍(lán)法(coomassie blue staining)又稱Bradford法。是測定蛋白質(zhì)含量屬于染料結(jié)合法的一種。由于其突出的優(yōu)點(diǎn)，正得到越來越廣泛的應(yīng)用。下面就著重介紹下考馬斯亮藍(lán)染色法原理。
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bca法測蛋白濃度步驟
bca法是常用蛋白濃度測定方法之一。其他蛋白濃度測定方法還有考馬斯亮藍(lán)法、bradford法測蛋白濃度等。本文是用bca法測定蛋白濃度。是使用索萊寶BCA蛋白濃度測定試劑盒完成本實(shí)驗(yàn)。
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轉(zhuǎn)鐵蛋白應(yīng)用
轉(zhuǎn)鐵蛋白（Transferrin） Cas；11096-37-0 轉(zhuǎn)鐵蛋白是血液中一種主要的糖蛋白, 負(fù)責(zé)將肝組織(是鐵貯藏的主要場所)的鐵向其它組織的細(xì)胞運(yùn)輸。沒有結(jié)合鐵的轉(zhuǎn)鐵蛋白稱作脫鐵轉(zhuǎn)鐵蛋白(apotransferrin), 它能夠緊緊結(jié)合兩個(gè)Fe3 , 此時(shí)稱為鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白(ferrotransferrin)。所有生長中的細(xì)胞表面都有鐵結(jié)合轉(zhuǎn)鐵蛋白的受體,在中性pH條件下轉(zhuǎn)鐵蛋白與鐵結(jié)合, 然后通過內(nèi)吞作用進(jìn)入細(xì)胞。在細(xì)胞內(nèi),在內(nèi)體的酸性環(huán)境下, 轉(zhuǎn)鐵蛋白釋放出鐵, 但是仍與膜受體結(jié)合在一起, 并與受體一同回到質(zhì)膜。當(dāng)細(xì)胞外環(huán)境變成中性時(shí), 轉(zhuǎn)鐵蛋白同受體脫離,并自由地結(jié)合鐵, 然后又開始新一輪循環(huán)。實(shí)際上, 轉(zhuǎn)鐵蛋白穿梭于細(xì)胞外液體和內(nèi)體之間, 避開了溶酶體, 快速傳遞細(xì)胞生長所需的鐵。
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蛋白marker發(fā)展史
蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)，常稱之為蛋白Marker。在免疫印跡（Western blot）試驗(yàn)中，分子量Marker雖不起眼，但意義重大，是陽性對照，是大小的標(biāo)準(zhǔn)，是必須的。只有Marker精確無誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力。除此之外，蛋白Marker還能夠提示電泳是否正常，轉(zhuǎn)移是否成功等信息。
