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共培養/遷移/侵襲檢測技術服務
細胞遷移是指細胞在接收到內源或外源遷移信號后而產生的移動。細胞遷移是通過胞體形變進行的緩慢的定向移動,涉及細胞覓食、傷口痊愈、胚胎發生、免疫反 應、感染和癌癥轉移等生理現象。因此通過對細胞遷移的研究,對阻止癌癥轉移、異體植皮等醫學應用方面具有一定意義。 細胞侵襲實驗是研究腫瘤細胞對基質膜 消化后的遷移運動,腫瘤細胞須經血管基底膜穿入深面間質后才能侵襲組織和轉移至遠處。
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shRNA慢病毒表達載體構建
siRNA直接轉染細胞可以方便的實現瞬時基因沉默,通常持續時間在3-7天左右,因目標基因差異而定,但是轉染效率極低。對于一些半衰期長的蛋白,要想觀察蛋白表達下降對細胞表型的長期影響就需要長期研究目標基因沉默的效果,shRNA表達載體是更適合的選擇。
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流式凋亡、周期檢測
細胞凋亡(Cell apoptosis)是指為維持內環境穩定,由基因控制的細胞自主的有序的死亡。細胞凋亡與細胞壞死不同,細胞凋亡不是一件被動的過程,而是主動過程,它 涉及一系列基因的激活、表達以及調控等的作用,它并不是病理條件下的損傷,而是為更好地適應生存環境而主動爭取的一種死亡過程。 細胞周期(Cell Cycle)是指細胞從一次分裂完成開始到下一次分裂結束所經歷的全過程,細胞的遺傳物質復制并均等地分配給兩個子細胞。細胞周期分為間期與分裂期兩個階 段。間期又分為三期:即DNA合成前期(G1期)、DNA合成期(S期)與DNA合成后期(G2期)。某些細胞在分裂結束后暫時離開細胞周期,停止細胞分 裂,執行一定生物學功能(G0期)。
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MTT/CCK8檢測1
CCK-8(Cell Counting kit-8)試劑中含有WST–8:化學名:2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽], 它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(1-Methoxy PMS)的作用下被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲臜產物(Formazan),生成的甲臜物的數量與活細胞的數量成正比,可采用酶聯 免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值,間接反映活細胞數量。
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載體構建
質粒載體可以有效地運載外源基因片段進入受體細胞,可以獨立自主大量復制并且很容易從宿主細胞中分離純化,因而在分子生物學使用十分廣泛。常用的載體可分為克隆載體和表達載體,根據載體進入受體細胞的不同,分為原核細胞表達載體、真核細胞表達載體以及穿梭載體
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Taqman探針 服務
熒光探針法是用序列特異的熒光標記探針來檢測產物,探針法的出現使得定量PCR技術的特異性比常規PCR技術大大提高。目前較常提及的有TaqMan探針、FRET雜交探針(熒光共振能量傳遞探針)和分子信標Molecular Beacon。
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實時熒光定量PCR(Taqman探針法)
實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。該技術結合了實時定量PCR儀、實時熒光定量試劑、通用電腦和自動分析軟件,構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
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SYBR Green 染料法(mRNA)---三復孔
實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。該技術結合了實時定量PCR儀、實時熒光定量試劑、通用電腦和自動分析軟件,構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。
